Antworten auf häufig gestellte Fragen zur Zellkultur

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Date:2022-07-14 16:15:00 Thursday

Summary: 1. Wenn ich ein Fläschchen mit gefrorenen Zellen erhalte, kann ich es dann direkt in flüssigem Stickstoff lagern? In vielen Fällen können Zellen, die auf Trockeneis (-80 °C) versandt werden, in flüssigen Stickstoff zurückgebracht und dann sch......

1. Wenn ich ein Fläschchen mit gefrorenen Zellen erhalte, kann ich es dann direkt in flüssigem Stickstoff lagern?
In vielen Fällen können Zellen, die auf Trockeneis (-80 °C) versandt werden, in flüssigen Stickstoff zurückgebracht und dann schnell aufgetaut werden. Eine solche Behandlung kann jedoch die Zelllebensfähigkeit verringern. Bei einigen empfindlichen Zelllinien kann dies die Zellwiederherstellung erschweren. Es wird angenommen, dass dieses Phänomen auf Änderungen in der Struktur von intrazellulären Eiskristallen aufgrund von Temperaturänderungen zurückzuführen ist. Daher wird empfohlen, die Zellen so schnell wie möglich nach Erhalt aufzutauen und zu kultivieren. Am besten reduzieren Sie die Lagerzeit auf -80°C, vorzugsweise wird diese Temperatur nur für den Versand verwendet.

2. Warum sollten Zellen in einem Tank mit flüssigem Stickstoff in der Gasphase statt in der flüssigen Phase gelagert werden?
Die Zellen werden zur leichteren Wiedergewinnung in flüssiger Stickstoffphase gelagert. In der flüssigen Phase von flüssigem Stickstoff kommen die Zellen in direkten Kontakt mit dem flüssigen Stickstoff, wenn das Kryovial nicht richtig verschlossen ist oder undicht ist, was die Lebensfähigkeit der Zellen nach dem Auftauen beeinträchtigt.

3. Wie ändert man das Medium für Suspensionszellen?
Zellen in Suspension können gezüchtet werden, indem einfach frisches Medium hinzugefügt wird (wenn es der Platz zulässt) oder indem Zellen durch Zentrifugation (100 x g für 5 min) vom alten Medium abgelöst werden, gefolgt von Resuspendieren der pelletierten Zellen in frischem Medium. Für die meisten Suspensionszelllinien ist jedoch das einfache Hinzufügen von Medium ein besserer Ansatz. Bei beiden Methoden muss das Medium aufgefrischt werden, bevor die Zellen ihre maximale Sättigungsdichte erreichen. Die Sättigungsdichte der Zellen liegt zwischen 3 x 10 5 und 2 x 10 6 in Abhängigkeit von der Zelllinie und den Kulturbedingungen (Ruhe oder Bewegung, Sauerstoffgehalt usw.).

Zellen müssen auf niedrigere Zellkonzentrationen verdünnt werden, um eine ausreichende Nährstoffrückgewinnung zu ermöglichen, um die Zellen in logarithmischem Wachstum zu halten. Wenn das Medium einfach gewechselt wird, ohne die Zelldichte zu verringern, erschöpfen die Zellen das Medium schnell und sterben ab. Wenn Zellen unter ihre Mindestdichte verdünnt werden, treten sie in eine Verzögerungsphase ein, wachsen sehr langsam oder sterben ab. Jede Suspensionszelllinie hat eine andere Sättigungsdichte und ein anderes Passageintervall, daher sind tägliche Zellzählungen der beste Weg, um eine Suspensionszelllinie zu überwachen.