Wie wird die Säule nach einer Kontamination gereinigt und regeneriert?

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Date:2021-11-25 16:42:09 Thursday

Summary: Wenn eine chromatographische Säule kontaminiert ist, unterscheidet sich ihr chromatographisches Verhalten etwas von dem einer nicht kontaminierten Säule. Verunreinigte Säulen können Gegendruckprobleme verursachen. Die kontaminierte Umkehrphasensä......

Wenn eine chromatographische Säule kontaminiert ist, unterscheidet sich ihr chromatographisches Verhalten etwas von dem einer nicht kontaminierten Säule. Verunreinigte Säulen können Gegendruckprobleme verursachen. Die kontaminierte Umkehrphasensäule muss gereinigt und regeneriert werden, um die ursprünglichen Betriebsbedingungen wiederherzustellen.
Der Schlüssel zur Regenerierung einer verunreinigten HPLC-Säule besteht darin, die Art der Verunreinigung zu kennen und ein geeignetes Lösungsmittel zu ihrer Entfernung zu finden. Wenn die Kontamination durch die Ansammlung von stark zurückgehaltenen Substanzen während wiederholter Injektionen verursacht wird, können einfache Schritte zur Entfernung dieser Kontaminationen oft das chromatographische Verhalten wiederherstellen. Manchmal wird die Chromatographiesäule nach vielen Operationen mit 90–100 % Lösungsmittel B (dem stärkeren Lösungsmittel in dem Umkehrphasensystem mit zwei Lösungsmitteln) für 20 Volumina gewaschen, um Verunreinigungen zu beseitigen. Beispielsweise können nichtwässrige Lösungsmittel wie Methanol, Acetonitril und Tetrahydrofuran für die restlichen Lipide in der Säule verwendet werden.

Generell haben alle Reinigungsverfahren ähnliche Formen. Die verwendeten Lösungsmittel steigen mit der Lösungsmittelstärke. Oft ist das letzte Lösungsmittel sehr hydrophob (wie Ethylacetat oder sogar Kohlenwasserstoff) und kann verwendet werden, um unpolare Substanzen wie Lipide und Öle aufzulösen. Wir müssen sicherstellen, dass jedes Lösungsmittel in einer Reihe von Lösungsmitteln mit dem nächsten Lösungsmittel gemischt werden kann.
Am Ende des Reinigungsprozesses muss mit Hilfe eines mittelstark mischbaren Lösemittels wieder in das ursprüngliche Lösemittelsystem zurückgekehrt werden. Beispielsweise ist Isopropanol ein sehr gutes Lösungsmittel als Zwischenstufe, da es mit n-Hexan oder Dichlormethan und auch mit Lösungsmitteln in der Wasserphase mischbar ist. Allerdings ist die Viskosität von Isopropanol sehr hoch und es muss auf einen geringen Durchfluss geachtet werden, um einen zu hohen Pumpendruck zu vermeiden. Beim Spülen der Chromatographiesäule wird die Spülflüssigkeit vom Auslassende der Chromatographiesäule direkt mit der Abfallflasche verbunden und kann nicht durch die Nachweiszelle fließen, um eine Kontamination der Nachweiszelle zu vermeiden.
Reversed-Phase-Chromatographiesäule verwendet keine Pufferlösung, bitte verwenden Sie die folgende Lösungsmittelserie zur Regenerierung:
100 % Methanol → 100 % Acetonitril → 75 % Acetonitril – 25 % Isopropanol → 100 % Isopropanol → 100 % Methylenchlorid → 100 % n-Hexan → 100 % Methylenchlorid → 100 % Isopropanol → 100 % Acetonitril.
Umkehrphasen-Chromatographiesäule verwendet Pufferlösung, bitte verwenden Sie die folgende Lösungsmittelserie zur Regenerierung:
Wasser → Acetonitril → Chloroform (oder Isopropanol) → Acetonitril → Wasser.